評(píng)估 NK 細(xì)胞的功能和表型
自然殺傷 (NK) 細(xì)胞作為人體對(duì)感染和癌癥的第一應(yīng)答細(xì)胞，發(fā)揮著免疫監(jiān)視的作用。了解 NK 的生物特性和活性是充分發(fā)掘其免疫應(yīng)答潛力的關(guān)鍵。Incucyte??實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)和 iQue? 3 高通量流式細(xì)胞儀可用于多種分析，如免疫分型、功能活性、細(xì)胞活性，以及細(xì)胞溶解效應(yīng)蛋白、細(xì)胞因子和趨化因子分析。
3D 免疫細(xì)胞殺傷
使用 Incucyte? 測(cè)定腫瘤球中的 ADCC效應(yīng)。免疫細(xì)胞存在時(shí)（未處理?xiàng)l件下，或存在抗-CD3 （10 ng/mL）?和 IL-2 （10 ng/mL）?或赫賽汀 （0.08 ng/mL - 50 μg）），SKOV-3 Incucyte? NucLight 紅色腫瘤球的相位和熒光融合圖像?？筛鶕?jù)紅色熒光強(qiáng)度來(lái)定量細(xì)胞毒性。圖中數(shù)據(jù)顯示了激活的 T 細(xì)胞群和赫賽汀誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性對(duì)腫瘤球產(chǎn)生的破壞作用。
自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的抗體依賴性細(xì)胞毒性作用，可誘導(dǎo)濃度依賴性靶細(xì)胞的死亡和顆粒酶的產(chǎn)生。
編碼的 Raji 腫瘤細(xì)胞 (2×104個(gè)/孔) 與來(lái)自兩個(gè)單獨(dú)供體的 PBMC (2×105個(gè)/孔) 共培養(yǎng)。PBMC 分別與以下三個(gè)抗CD20 抗體之一共同孵育：Ab-1 (IgG1)、Ab-2 (IgG1) 或陰性對(duì)照 Ab-3 (IgA2)。濃度范圍在 10 μg/mL - 0.128 ng/mL 之間。
4 小時(shí)后，使用人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒和 iQue? 3 分析 10 μL 樣品，以評(píng)估腫瘤細(xì)胞殺傷情況，同時(shí)還使用 iQue? 人 NK 細(xì)胞配套試劑盒測(cè)定了顆粒酶 A。(A,B) 來(lái)自兩個(gè)供體的靶細(xì)胞殺傷對(duì)抗體的響應(yīng)不同。(C,D) 兩個(gè)供體細(xì)胞顆粒酶 A 的產(chǎn)生都呈現(xiàn)出濃度和供體依賴性。(E,F) NK 細(xì)胞上 CD16 的檢出量隨抗-CD20 抗體濃度的增加而降低。這可能是由 CD16 的脫落或 CD20 抗體的競(jìng)爭(zhēng)導(dǎo)致。
細(xì)胞因子刺激增強(qiáng)了 NK 細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞直接殺傷作用。將編碼的 K562 腫瘤細(xì)胞 (2×104個(gè)/孔) 與富集的（陰性選擇）人 NK 細(xì)胞共培養(yǎng)，人 NK 細(xì)胞已在單獨(dú)培養(yǎng)基（非活化 NK 細(xì)胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 細(xì)胞）的培養(yǎng)基中孵育 16-18 小時(shí)，效靶比為 1:1 或 5:1。在 4 小時(shí)和 24 小時(shí)后，使用 iQue? 人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒和 iQue? 3 對(duì) 10 μL 樣品進(jìn)行分析，以評(píng)估腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。(A) 直方圖顯示了靶細(xì)胞在與非活化或細(xì)胞因子激活的 NK 細(xì)胞共培養(yǎng) 4 小時(shí)后的活性。(B,C) 圖中匯總了在與非活化或細(xì)胞因子激活的 NK 細(xì)胞共培養(yǎng) (B) 4 小時(shí)或 (C) 24 小時(shí)后死亡腫瘤細(xì)胞的百分比。
靶細(xì)胞的存在會(huì)誘導(dǎo) NK 細(xì)胞的活化，并通過(guò)細(xì)胞因子刺激進(jìn)一步增強(qiáng)。將編碼的 K562 腫瘤細(xì)胞 (2×104個(gè)/孔) 與富集的（陰性選擇）人 NK 細(xì)胞共培養(yǎng)，人 NK 細(xì)胞已在單獨(dú)培養(yǎng)基（非活化 NK 細(xì)胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 細(xì)胞）的培養(yǎng)基中孵育 16-18 小時(shí)，效靶比為 5:1。在共培養(yǎng) 24 小時(shí)后，取出 10 μL 樣品，使用 iQue? 人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒和 iQue? 3 進(jìn)行分析。(A) 活化標(biāo)志物（CD69 和 CD25）的表達(dá)情況。(B) IFNg 的產(chǎn)生和顆粒酶 B 的分泌情況。(C) 將 iQue? 人 NK 細(xì)胞配套試劑盒和 iQue? 人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒相結(jié)合，對(duì)其他額外的細(xì)胞因子進(jìn)行平行評(píng)估。 ?NK = 自然殺傷細(xì)胞。T = K562 腫瘤靶細(xì)胞。
IL-2 和 IL-15 活化后，多種效應(yīng)蛋白（如顆粒酶 B 和 CCL5 (RANTES)）的表達(dá)和分泌增加。這些作用在靶細(xì)胞和 NK 細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)進(jìn)一步增強(qiáng)。
資源和產(chǎn)品
參考文獻(xiàn)
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