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利用實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析了解 B 淋巴細(xì)胞的特異性免疫

B 淋巴細(xì)胞

B 細(xì)胞在特異性免疫系統(tǒng)中發(fā)揮中心作用,負(fù)責(zé)產(chǎn)生針對(duì)入侵性病原體的抗原特異性免疫球蛋白。B 細(xì)胞的激活和增殖對(duì)抗體分泌至關(guān)重要,但持續(xù)性刺激也會(huì)導(dǎo)致 B 細(xì)胞白血病和淋巴瘤細(xì)胞的存活和生長(zhǎng),如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。

Incucyte?實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)已被用于評(píng)估 B 細(xì)胞的關(guān)鍵功能,包括細(xì)胞活化和聚集,抗體內(nèi)化,以及通過(guò)細(xì)胞凋亡評(píng)估 B 細(xì)胞腫瘤的細(xì)胞凋亡,和免疫細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)。


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活化和聚集

非貼壁B 細(xì)胞系的增殖。通過(guò)相差圖像對(duì) WIL-2NS 細(xì)胞(一種 B 細(xì)胞系)的增殖進(jìn)行定量。 與預(yù)期一致,起始匯合度由接種密度決定。 通過(guò)向每個(gè)加樣孔中接種已知數(shù)量的細(xì)胞,等待沉降后進(jìn)行定量分析,完成匯合度測(cè)量的驗(yàn)證。然后,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行滲透處理,測(cè)定三磷酸腺苷 (ATP) 的含量,提供二次讀數(shù)。研究發(fā)現(xiàn),匯合度和細(xì)胞數(shù)量或 ATP 測(cè)定之間存在很強(qiáng)的相關(guān)性。

細(xì)胞凋亡(Annexin V 綠色染料)

檢測(cè) B 細(xì)胞在細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)后的凋亡情況。在 Incucyte? Annexin V 綠色染料的存在下,獲取 WIL2-NS B 淋巴瘤細(xì)胞經(jīng)溶劑或喜樹(shù)堿 (1 μM) 處理 24 小時(shí)后的代表性圖像。時(shí)間進(jìn)程曲線顯示,Incucyte?? Annexin V 綠色染料發(fā)出的綠色熒光增加,表明喜樹(shù)堿誘導(dǎo)的細(xì)胞膜表面磷脂酰絲氨酸呈時(shí)間和濃度依賴性增加。

免疫細(xì)胞殺傷

測(cè)定白血病細(xì)胞的抗體依賴性細(xì)胞毒作用 (antibody dependent cellular cytotoxicity, ADCC)。存在免疫細(xì)胞時(shí)(未處理,或存在 IL-2 (10 ng/mL) 和 IL-12 (10 ng/mL) 或美羅華 (Rituxan) (15 ng/mL - 100 μg/mL)),表達(dá) NucLight?紅色核標(biāo)記物的 Ramos B 淋巴細(xì)胞的相位和熒光融合圖像??筛鶕?jù)紅色熒光強(qiáng)度的損失來(lái)定量細(xì)胞毒性。

定量抗體內(nèi)化

臨床上使用的抗體美羅華 (Rituxan) 的內(nèi)化。使用 Incucyte? FabFluor 標(biāo)記的美羅華(10 ng/mL 至 10 μg/mL)處理 Raji 細(xì)胞(B 細(xì)胞樣)(30, 000個(gè)/孔)。使用 20 倍物鏡在 12 小時(shí)內(nèi)每 30 分鐘采集一次高清相位和紅色熒光圖像。所有數(shù)據(jù)顯示為至少 4 孔的平均值 ± SEM,時(shí)間進(jìn)程數(shù)據(jù)顯示為歸一化的紅色區(qū)域(紅色區(qū)域/相位區(qū)域)。

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